O teste ELISA detecta inúmeras doenças, por isso tem sido amplamente utilizado na medicina e muito mais. No entanto, o teste ELISA é mais conhecido por seu diagnóstico da doença de Lyme. O que é o teste ELISA? Como interpretar os resultados? Qual o preço do teste?

Conteúdo:

  1. Teste ELISA - o que detecta? Uso do ELISA
  2. Teste ELISA - o que é o teste?
  3. Teste ELISA e doença de Lyme - quando realizar?
  4. Teste ELISA - preço. Quanto custa um teste ELISA?
  5. Teste ELISA - resultados. Eles podem ser falsos positivos?
  6. Teste ELISA - resultados. Eles podem ser falsos negativos?

Teste ELISA , ou seja, o ensaio imunoenzimático, é um método laboratorial comumente utilizado que serve, entre outros, para a detecção quantitativa de anticorpos no sangue.

Devido a issoteste ELISAencontradoaplicaçãono diagnóstico de doenças bacterianas, comodoença de Lyme com Lyme.

A vantagem do método ELISA é sua simplicidade, execução rápida e alta sensibilidade. O método ELISA é realizado usando placas plásticas especiais com poços preenchidos com, por exemplo, proteínas Borrelia (antígenos) e anticorpos monoclonais específicos, que são projetados para detectar anticorpos na amostra do paciente.

Teste ELISA - o que detecta? Uso do ELISA

A alta sensibilidade e simplicidade do método ELISA o tornaram aplicável no diagnóstico de muitas doenças, mas é mais conhecido como o método diagnóstico da doença de Lyme.

No diagnóstico da borreliose de Lyme, a chamada ELISA indireto, que permite detectar IgM ou IgG específicos no material testado. Da mesma forma, os anticorpos podem ser detectados para fins de diagnóstico:

  • infecções virais: vírus do herpes (herpes, herpes zoster, Epstein-Barr, citomegalovírus), HIV, vírus da hepatite (HBV e HCV)
  • infecções por protozoários: toxoplasmose, giardíase
  • doenças autoimunes: doença celíaca (anticorpos anti-tTG ou anti-DPG), doença de Hashimoto (anticorpos anti-TG e anti-TPO), doenças inflamatórias intestinais (anticorpos anti-ASCA e anti-ANCA)
  • doenças parasitárias e alergias,em que anticorpos IgE específicos são detectados. Seu nível aumentado pode indicar a presença de alergias, por exemplo, a pólen e alimentos, ou invasões parasitárias (tênia armada, lombriga humana)

Existem também modificações no método ELISA (chamado ELISA sanduíche), que permitem a detecção de uma amostra testada de proteínas que não sejam anticorpos. Então o objetivo da pesquisa é detectar no material biológico:

  • fragmentos de vírus ou bactérias, na maioria das vezes são antígenos específicos de um determinado patógeno
  • hormônios séricos, por exemplo, estrogênio, prolactina, TSH, fT4, cortisol
  • enzimas, por exemplo, calprotectina, elastase pancreática, fosfatase alcalina
  • marcadores tumorais, por exemplo, CA-125
  • presença de drogas no soro

Este método também é usado na indústria alimentícia, onde podem ser detectados vestígios de alérgenos (por exemplo, leite, amendoim), OGMs ou toxinas nos alimentos.

Teste ELISA - o que é esse teste?

O diagnóstico de, por exemplo, borreliose de Lyme pelo método ELISA consiste na detecção de proteínas imunes em material biológico - anticorpos que surgem durante a resposta contra antígenos de Borrelia.

Os anticorpos são testados em duas classes, IgM e IgG. IgMs são os primeiros anticorpos a aparecerem no corpo em contato com bactérias e a diminuir com o tempo.

Seu lugar é ocupado por anticorpos IgG mais persistentes que podem permanecer no corpo por várias dezenas de anos.

Desta forma, a presença de bactérias no organismo é testada indiretamente através da detecção de anticorpos especificamente direcionados contra espiroquetas Borrelia.

Anticorpos em vários estágios de infecção podem ser direcionados contra uma variedade de proteínas Borrelia. Por exemplo, em um estágio inicial é a proteína p41.

Nos estágios posteriores, mais e mais proteínas começam a aparecer, como p21, p30, p39, p43. É por isso que o diagnóstico da doença de Lyme é extremamente difícil.

A seleção de proteínas bacterianas é extremamente importante para que o teste tenha um alto valor diagnóstico. Portanto, rotineiramente no diagnóstico da doença de Lyme, devem ser utilizados os testes ELISA de II ou III geração, nos quais os conjuntos de proteínas são selecionados de forma a obter o resultado mais confiável.

teste ELISA e doença de Lyme. Quando executar?

Borreliose de Lyme é uma doença bacteriana causada pela bactéria Borrelia burgdorferi e suas muitas variedades.

O diagnóstico da doença não é fácil devido à complexidade da resposta imune contra Borrelia e às imperfeições dos métodos laboratoriais.

O método laboratorial mais utilizado é o método ELISA altamente sensível que detecta anticorpos específicos produzidos contra proteínas bacterianas.

No diagnóstico da borreliose de Lyme, utiliza-se o método ELISA indireto no qual se distinguem as seguintes etapas:

  • incubação dos poços na placa com material coletado do paciente, por exemplo, soro. Se houver anticorpos contra Borrelia no material testado, eles se ligam a proteínas no fundo do poço de reação
  • então o excesso de soro é enxaguado com um fluido de lavagem especial (tampão) e o chamado conjugado, ou seja, um anticorpo ligado a uma enzima que se liga a anticorpos previamente ligados nos poços de reação
  • O substrato para o conjugado é adicionado posteriormente e não há (positiva) ou nenhuma reação de cor (negativa)
  • o último passo é a leitura pelo leitor (espectrofotômetro) da concentração de anticorpos contra Borrelia no soro do paciente

O método ELISA para a doença de Lyme é realizado com sangue e, no caso de sintomas neurológicos (neuroborreliose), também com o líquido cefalorraquidiano.

O líquido sinovial não deve ser testado, pois há uma alta probabilidade de resultados falso-positivos.

A base para o diagnóstico da doença são os sintomas clínicos que a indicam, confirmados pelos resultados dos exames laboratoriais.

A adição de um resultado de teste laboratorial sem a presença de sintomas não autoriza o diagnóstico da doença de Lyme, pois foi demonstrado que anticorpos para espiroquetas Borrelia também são detectados em pessoas saudáveis.

O diagnóstico sorológico da borreliose de Lyme começa com um teste de triagem ELISA semiquantitativo. Se o resultado for negativo, significa que nenhuma espiroqueta Borrelia foi detectada ou o resultado é falso-negativo.

Se o resultado for positivo ou fracamente positivo (equívoco), teste de Western blot confirmatório, que é altamente específico.

Isto é para confirmar a "veracidade" dos resultados obtidos com o método ELISA. Durante o diagnóstico, você não pode pular nenhuma das etapas acima e, por exemplo, realizar diagnósticos usando o método Western blot ou fazer um diagnóstico com base em um resultado positivo usando apenas o método ELISA.

Na Polônia, o diagnóstico da doença de Lyme muitas vezes termina no primeiro estágio de triagem, o que causa uma interpretação errônea de resultados positivos ou fracamente positivos.

Vale a pena saber

Teste ELISA - preço. Quanto custa um teste ELISA?

O teste custa em torno de 60zlotys e é feito imediatamente. No entanto, você pode esperar cerca de três meses pelos resultados da indicação.

Teste ELISA - resultados. Eles podem ser falsos positivos?

Resultados falso-positivos resultam da reatividade cruzada de anticorpos IgM com outras proteínas. Os anticorpos produzidos pelo organismo podem reconhecer "incorretamente" um antígeno de outros microrganismos como o antígeno Borrelia.

Os "erros" mais comuns ocorrem em pessoas infectadas com treponema pallidum, herpes vírus e em pessoas com lúpus eritematoso sistêmico e outras doenças reumáticas.

Teste ELISA - resultados. Eles podem ser falsos negativos?

Resultados falsos negativos podem aparecer no estágio inicial da infecção, então o teste deve ser repetido após cerca de 3-4 semanas. Isso é chamado janela sorológica, ou seja, o período inicial da infecção em que o organismo ainda não "conseguiu" produzir anticorpos específicos.

Da mesma forma, em pessoas imunocomprometidas que não produzem anticorpos suficientes.

Um grande problema, principalmente em infecções muito intensas, é o aparecimento das chamadas complexos imunes que consistem em antígenos de espiroquetas de Borrelia e anticorpos específicos para eles.

Isso torna os anticorpos "invisíveis" para métodos comumente usados, como ELISA, e embora estejam presentes no material testado, não podem ser detectados.

Nesses casos, o laboratório pode usar a quebra de imunocomplexos. Este tratamento é projetado para liberar os anticorpos. No entanto, este método não é muito utilizado devido à f alta de padronização nos laboratórios.

Vale a pena saber

Por que o diagnóstico da doença de Lyme não é fácil?

Isso se deve à complexidade da resposta imune contra a Borrelia e às limitações dos métodos laboratoriais. A diversidade de variedades e o surgimento de novas infecções causadoras de infecções, principalmente no continente europeu, não facilitam o desenvolvimento de métodos diagnósticos eficazes.

Mais variedades apareceram recentemente na Europa, como Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana e Borrelia spielmanii. Além disso, no corpo, as espiroquetas Borrelia podem se transformar em cistos ou ficar em locais do corpo inacessíveis às células do sistema imunológico.

Sendo assim "invisível" ao sistema imunológico. Além disso, foi demonstrado que os tecidos podem conter fragmentos de bactérias que possuem propriedades fortemente pró-inflamatórias. Acredita-se que eles sejam responsáveis ​​pelos sintomas crônicos da doença de Lyme, apesar dos resultados negativos do estudolaboratório.

Referências

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Sobre o autorKarolina Karabin, MD, PhD, bióloga molecular, diagnostica laboratorial, Cambridge Diagnostics PolskaBiólogo de profissão, especializado em microbiologia, e diagnosticador laboratorial com mais de 10 anos de experiência em trabalho laboratorial. Graduado pela Faculdade de Medicina Molecular e membro da Sociedade Polonesa de Genética Humana, chefe de bolsas de pesquisa do Laboratório de Diagnóstico Molecular do Departamento de Hematologia, Oncologia e Doenças Internas da Universidade Médica de Varsóvia. Defendeu o título de doutora em ciências médicas na área de biologia médica na 1ª Faculdade de Medicina da Universidade Médica de Varsóvia. Autor de diversos trabalhos científicos e de divulgação científica na área de diagnóstico laboratorial, biologia molecular e nutrição. Diariamente, como especialista na área de diagnóstico laboratorial, ele dirige o departamento de conteúdo da Cambridge Diagnostics Polska e colabora com uma equipe de nutricionistas da CD Dietary Clinic. Ele compartilha seu conhecimento prático em diagnóstico e dietoterapia de doenças com especialistas em conferências, sessões de treinamento e em revistas e sites. Ela está particularmente interessada na influência do estilo de vida moderno nos processos moleculares do corpo.

Categoria:

Pesquisa